更新時間：2018-10-09
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酶聯免疫吸附實驗（ELISA）已經成為實驗室常用的檢測蛋白含量變化的實驗技術，常用的檢測方法是用抗原包被孔板，然后用一抗和二抗檢測抗原的變化。這里使用兩種抗體的原因一方面是信號放大的需要，另一方面是要減少成本。假如每種抗體都用酶或者熒光素標記的話，那將會需要多少種標記的抗體呢？而且可以肯定價格一定不菲。而用標記二抗的方法就可以大大減少需要標記抗體的數目，同時也能提高標記抗體的效用，這樣就能用盡量少的標記抗體滿足盡量多的實驗要求。
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引起 ELISA 測定結果與文獻報導不一致的原因主要有三點，試劑因素、標本因素和操作因素。試劑因素：1. 試劑應選擇靈敏度高、特異性好、穩定性好、批間差小、操作方便的試劑。 2.不同廠家的試劑一定不能混用，包括底物和洗滌液。由于校準標準有差異，還有抗體、檢測方法、試劑、交叉反應等因素都會導致對樣本的檢測結果不一致。如：有的廠家酶標板孔間 CV 值大于 20%，標記酶的活性及顯色液的穩定性比較差，使用劣質的試劑必然導致結果的假陽性或假陰性。 3. 要注意試劑的批號和出廠日期，雖然試劑的有效期多為 1 年，好選擇剛出廠的試劑盒。 4. 避免選擇假的 ELISA 試劑盒。有些廠家為夸大生產 ELISA 的指標范圍，用一種指標來冒充其它指標，造成各種種屬、各種指標都可以做的假象。標本因素和操作因素：血清是常用的 ELISA 標本，血漿一般可視為與血清同等的標本，標本引起的假陽性和假陰性結果主要是干擾性物質所致，分為內源性物質和外源性物質兩種。 內源性物質:有人認為大約 40%的人血清標本中含有非特異性干擾物質，可以不同程度影響檢測結果。常見的干擾物質有：類風濕因子、補體、嗜異性抗體、嗜靶抗原自身抗體、醫源性誘導的抗鼠 Ig (s) 抗體、交叉反應物質和其它物質等。外源性物質:外源性物質常常是由于用于 ELISA 測定的血標本的采集、貯存等不當所致。如標本溶血、標本被細菌污染、標本貯存過久、標本凝集不全和采血管中添加物等影響。
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編輯：小檀20181009
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