干細胞培養步驟

1、擴增：不同的干細胞，其擴增方法不同。如造血干細胞為懸浮培養，而腫瘤干細胞則為貼壁培養的細胞。2、消化：根據細胞耐受性的不同，有多種方法，如機械法，化學法，以及膠原酶、胰酶消化等不同方法。3、凍存：取處于對數期的干細胞,消化,并吹打為單細胞懸液,用2X培養基重懸細胞后，將等體積DMSO逐滴加入細胞懸液中，輕輕吹打混勻，重懸細胞于凍存管中，并置于凍存盒中，凍存盒放入-80℃冰箱。4、分化：鑒定干細胞的一項重要指標就是它的分化能力。一般分化采取加入細胞因子誘導、共培養、小分子刺...

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細胞培養用耗材污染與防治

一、培養用液1、未滅菌的試劑：高壓或過濾除菌。2、物品儲放區不潔：經常清潔并作滅菌處理。3、消毒過程不標準：檢查高壓滅菌器是否工作正常；過濾后檢查濾膜是否破裂；滅菌后的液體仍需做無菌試驗。4、一次性無菌用品不合格：進行質量檢測或更換供應商。二、取材1、原代組織來源有污染，不要把動物帶入培養室處理；2、可能有污染的組織應在酒精中浸泡30s－1min，在清洗用的PBS中加入抗生素。三、玻璃器皿1、儲存時灰塵或細菌孢子進入－一消毒后的器皿應嚴密包裹，置于無菌物品放置區；未包裹物品放...

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細胞的兩種運輸方法

一、凍存運輸使用干冰置于塑料泡沫盒中，處理得當，可以保存3天。一旦出現融解，細胞活力將急劇下降。將細胞凍存管嚴密包裹，所用塑料泡沫盒應該不小于300×300×300mm，壁的厚度約為50mm，內部空間為200×200×200mm，這樣大的空間需放入5kg干冰。以zui快的速度將細胞從液氮轉入干冰中，否則細胞將以10～20℃／min的速度升溫。不能讓溫度高于－50℃。到達目的地后，即可按常規復蘇處理。二、活細胞運輸細胞應該處于對數生長期早期或中期，狀態良好。如果細胞密度過大，培...

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生化試劑的類型概述

一、按劑型分類1、液體試劑①R1和R2分開保存,延長穩定性；瓶間差小，沒有復溶時水質引起的差異，使用方便；②可較*排除樣品空白和內外源干擾物。2、干粉試劑將各組份溶于液體中分裝再凍干，或用球磨粉碎、或混合后打成片劑，用前再加入量的緩沖液使其溶解（稱復溶）。二、按試劑組成分類1、單試劑①優點：操作簡便適用于各類生化分析，節約試劑位。②缺點：配方復雜（穩定劑），穩定性，不能*避免內外源物質干擾。2、雙試劑①優點：可較*排除樣品空白和內外源干擾物，試劑穩定，便于儲存，運輸和使用，可...

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細胞復蘇的方法改進

一、背景細胞存儲于-170°以下的液氮罐中，在細胞復蘇時需要快速地將細胞凍存管放入37°水浴鍋中快速升溫至37°避免對細胞造成損傷。在復蘇過程中凍存管需要用手拿著在搖晃，一個人同時只能拿2-4管，當復蘇較多的細胞時一個人就無法操作，這給復蘇細胞帶來了極大的不便。二、方法改進采用一個裝15ml離心管的泡沫板制作一個凍存管托盤，其托盤為：將其底部穿通，孔夠凍存管的大小相當，使凍存管放入恰好卡住；在托盤中間插一個桿作為手柄。在復蘇時將凍存管放在泡沫板托盤上，手拿著托盤手柄，將載有凍...

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凍存細胞解凍步驟及注意事項

一、凍存細胞解凍步驟1、將細胞凍存管從加有液氮的保溫桶中用鑷子夾牢，快速在37度水浴鍋中擺動，使凍存液迅速解凍融化。注意在這過程中盡量使凍存管蓋位于水面上。2、待凍存管中大部分內容物已呈液態時，將凍存管表面消毒后移入生物安全柜。二、注意事項1、在細胞復蘇操作時，應注意融化凍存細胞速度要快，可不時搖動凍存管，使之盡快通過zui易受損的溫度段（-5～0℃）。這樣復蘇的凍存細胞存活率高，生長及形態良好。2、從液氮罐中取出凍存管，有時因凍存管未封嚴，浸入了液氮，取出后因凍存管內液氮迅...

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生化試劑的校準與結果溯源性

酶的校正要滿足在同一方法學、同一測定條件、與理論計算的FACTOR值差異不大，沒有發現有明顯影響因素，方可進行校正。檢驗結果溯源性，得建立一個可靠的參考系統作為準確性基礎，然后將準確性轉移到常規方法測定中去，使常規方法測定結果可溯源到參考系統所提供的準確性基礎上來。在實現溯源性目標過程中，永遠以患者新鮮標本為實驗對象，以方法學對比試驗方法為驗證手段。方法學對比試驗常采用回歸方程進行統計分析，假如斜率接近1，截距較小，這意味著實驗室常規方法對標本測定結果和溯源目標參考系統對標本...

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如何進行細胞周期的測定

一、原理細胞周期指細胞一個世代所經歷的時間.從一次細胞分裂結束到下一次分裂結束為一個周期.細胞周期反應了細胞增殖速度.單個細胞的周期測定可采用縮時攝影的方法,但它不能代表細胞群體的周期,故現多采用其他方法測群體周期.測定細胞周期的方法很多,有同位素標記法,細胞計數法等,這里介紹一種利用BrdU滲入測定細胞周期的方法.BrdU（5-溴脫氧尿嘧啶核苷）加入培養基后,可做為細胞DNA復制的原料,經過兩個細胞周期后,細胞中兩條單鏈均含BrdU的DNA將占l/2,反映在染色體上應表現為...

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